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光學顯微鏡術(shù)
至此,所提及的那些技術(shù)只能應(yīng)用于由固定劑殺死的細胞。它們
作為有關(guān)組織培養(yǎng)貴料的來源無疑地是有價植的,但是,它們顯然都
不能達到研究活的動物細胞培養(yǎng)技術(shù)的主要目的。
在普通光學顯微鏡下離體細胞是透明的,實際上是看不見的,這
一事實對早期組織培養(yǎng)工作者十分不利。那時詳細研究活細胞唯一可
用的方法是暗視野照明,即應(yīng)用一個特殊的臺下聚光鏡問接地照射標
本,所以只有進人物鏡的光才能被細胞散射,
因而在黑暗的背景下顯出欣亮的是細胞部分。不過,對這種技術(shù)
來說細胞生長容器的光學特性是很關(guān)鍵的,由于只有很少部分的光參
與成像作用,因此除非顯微鏡配備照像閃光燈設(shè)備,否則需耍長期曝
光才能拍成照片。
相差顯微鏡
1942年德國物理學家(Frits Zernicke)為顯微鏡學家解決。了
觀察活細胞的問題。他在研究天文望遠鏡的鏡面時,發(fā)現(xiàn)了相差的理
論,并認識到這一可應(yīng)用于顯微鏡。
配備有相差的儀器時,人們很快地意識到這在組織培養(yǎng)實驗室里
幾乎也是必不可少的
相差顯微鏡在活細胞研究上連續(xù)不斷地作出了無數(shù)的成果。此外,
由于物理學研究而發(fā)明了相差顯微鏡,也表明生物學的發(fā)展愈來愈依
賴于基礎(chǔ)科學的發(fā)展。
為了使皿微鏡產(chǎn)生一個相差像,需要加人另一些組件,它們包括
一個在臺下聚光鏡光欄中帶有透明孔的黑盤和一個在物鏡聚焦面背部
有環(huán)狀溝的“相差板”。
在物鏡的后聚焦面形成一個在聚光鈍下清晰的環(huán)狀像,此像必須
與相差板的環(huán)狀溝相一致,簡言之,與光通過密度小的區(qū)域相比,被
標本的光學致密結(jié)構(gòu)所反射的光減弱(即相消失)。
相差系統(tǒng)使這兩類光相互作用,并把肉眼不能察覺的相差改變成
眼睛能觀察的波幅差。因此,使用通常類型的設(shè)備,細胞的致密結(jié)構(gòu)
在最后成像中看起來較深黑。
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