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本文標(biāo)題:"激光共焦熒光顯微鏡測(cè)試-熒光技術(shù)的應(yīng)用"

新聞來(lái)源:未知 發(fā)布時(shí)間:2016-6-27 17:23:41 本站主頁(yè)地址:http://m.zulinpingtai.cn

激光共焦熒光顯微鏡測(cè)試-熒光技術(shù)的應(yīng)用

熒光漂白

  光漂白(也稱(chēng)為褪色)是在光照條件下使其發(fā)生化學(xué)反應(yīng)或結(jié)構(gòu)改變
,從而失去發(fā)熒光的特性,就是所謂的漂白。它常用于生物體內(nèi)擴(kuò)散速
率常數(shù)的測(cè)定。由單重激發(fā)態(tài)躍遷到三重激發(fā)態(tài),熒光團(tuán)會(huì)和另外的分
子反應(yīng)產(chǎn)生不可逆的共價(jià)修正。簡(jiǎn)而言之,熒光漂白是熒光團(tuán)的光化學(xué)
破壞。在熒光漂白之前,某一特定熒光團(tuán)的激發(fā)和輻射周期的平均數(shù)值
取決于分子結(jié)構(gòu)及所處環(huán)境。一些熒光團(tuán)漂白很快,只需釋放一些光子
,然而對(duì)于其他的,在漂白之前需要經(jīng)歷成千上萬(wàn)次周期。

  每一個(gè)熒光團(tuán)都有不同的光漂白特性。對(duì)于激光共焦熒光顯微鏡來(lái)
講,光漂白是最大的問(wèn)題,因此實(shí)際測(cè)試中需要考慮避免或減輕光漂白
程度。因此在激光共焦熒光顯微鏡測(cè)試中,需要選取合適的染料,該染
料可以在正常激光強(qiáng)度照射下最大程度減輕光漂白程度。當(dāng)具有光漂白
的染料用于測(cè)試中,以下三種方法可以降低光漂白程度:盡可能用低的
激光強(qiáng)度;盡可能降低照射的時(shí)間(實(shí)際測(cè)試中,盡快完成一次測(cè)試);
采用自由基清除體。

  多數(shù)的光漂白可以歸結(jié)于自由基。采用自由基清除體則能降低光漂
白的速率。常用自由基清除體包括五倍子酸丙烷、對(duì)苯二胺以及三乙烯
二胺(DABCO)。

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